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Objetivo. Determinar la seropositividad de N. caninum en bovinos no vacunados contra el síndrome reproductivo y los factores de riesgo asociados a la presentación de esta enfermedad en los hatos lecheros del municipio de Pasto, Nariño. Materiales y métodos. Se seleccionaron fincas sobre los 2527 msnm. Se analizaron muestras de suero de 238 vacas Holstein mediante la prueba de ELISA indirecta para determinar la seropositividad a N. caninum y se realizó una encuesta epidemiológica incluyendo variables sobre el ganado como: medidas sanitarias y de manejo. Se realizó un análisis multivariado mediante regresión logística binaria con un intervalo de confianza del 95% (p<0.05) utilizando el programa SPSS19®. Resultados. La prevalencia estimada para N. caninum fue de 76.9%. Los factores de riesgo asociados a Neosporosis en las fincas estudiadas son los residuos de abortos, que no se entierran y se dejan a la intemperie (OR 5.49; IC 95% 1.7-17.7), alimentar los perros con desperdicios (OR 15.44 IC 95% 1.94-123.22) y la monta directa (OR 14.62 IC 95% 1.55-137.53).